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猪细小病毒病PCR诊断试剂盒
发布时间:2022-04-03   

【注意】 用前请认真阅读注意事项。

【用途】 用于猪细小病毒病的检测、诊断和流行病学调查。

试剂 

编号

数量

保存

SR-I

1mL

室温

SR-II

120μl

-20

SR-III

800μl

4

TU-1

110μl

-20

TU-2

60μl

-20

TU-3

20μl

-20

TU-4

20μl

-20

TU-5

1.5mL

-20

TU-6

10μl

-20

TU-7

35μl

4

TU-8

60μl

4

TU-9

30μl

4

T

1mL

-20

 

【操作步骤】

1. 病料处理

   取适量病料流产胎儿或其淋巴结、肺脏等组织,于灭菌研钵充分研磨,用PBS按照13稀释成均匀乳剂,-20反复冻融3次以上。

2 . DNA的抽提

(1) 取已冻融好的病料8000r/min离心5min,取上清500μl(或质控样品T500μl,加50μSR-I6μSR-II50水浴1-2h,并不时颠倒混匀一下。

(2) 加入等量酚:氯仿(11),漩涡振荡20s4℃、12000r/min,离心5min

(3) 取上清,加入等量氯仿,振荡混匀,4℃、12000r/min,离心5min

(5) 400μl上清,加入800μ无水乙醇,再加40μSR-III,混匀。-20℃放置30~120min4℃,12000r/min,离心10min,小心弃上清,沉淀即为DNA。用75%乙醇(灭菌双蒸水配,每次加入500μl)冲洗2次,小心吸去75%乙醇,勿使DNA丢失,室温晾干或超净工作台风干15-25min,加入20μTU-5溶解即为模板,即用或-20℃保存备用。

3.PCR操作

加样体系:(将下列试剂加入0.5mLPCR反应管中,最好在冰浴条件下加样。)

 


 

反应条件:


 

4.电泳

    称量0.25g琼脂糖,放入锥形瓶,加入25mL 1×TAE液(可配置50×浓缩液,储存备用),于微波炉中熔解,加入1.5μlTU-9混匀。封闭好电泳槽,加入梳子,倒入琼脂凝胶,待凝固后,将PCR产物6μl混合1.5μl TU-7,加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加入3μlTU-8100v 电压下,1×TAE液中电泳30分钟,在紫外成像仪下观察结果。

 

【结果判定】

    450bp位置出现扩增带,实验结果为阳性(如图)。

                              

                                     1.DL2000 MarkerTU-9      

                                     2.标准阳性片段

 

 

 

【注意事项】

1. 每次使用,开盖之前请先瞬时离心,使试剂沉于管底。

2. 本试剂盒为20头份量试剂,操作失误或移液器不准确造成最终剂量不够情况,不予负责。

3. 所有试剂在要求温度下保存,-20℃保存试剂尽量减少反复冻融,使用后的试剂立即放回,避免在室温搁置太久。

4. 尽量建立PCR试验操作区,避免交叉污染。

5. 加样和反应程序严格按照说明书进行,由于操作失误、移液器不精确、定时不准确造成无结果情况,不予负责。

6. 吸头、离心管和PCR管在使用前,要高压灭菌,操作过程尽量不要用手接触到管内壁,可用镊子夹取。

7. 注意防止试剂污染,在有效期限前用完。

8. TU-9所装试剂为致癌物质,避免接触到皮肤。如若不甚接触,请立即用洗涤剂清洗。

【有效期】

本制品有效期为1年,生产日期见包装内侧。

【联系人】 王金良、管宇             电话:0543-3403060